ОЦЕНКА ВОЗМОЖНОСТЕЙ СНИЖЕНИЯ ТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ АНТИГЛАУКОМНОГО ГИПОТЕНЗИВНОГО ПРЕПАРАТА, СОДЕРЖАЩЕГО КОНСЕРВАНТ БЕНЗАЛКОНИЯ ХЛОРИД, НА ПЕРВИЧНУЮ КУЛЬТУРУ КЛЕТОК ЛИМБА РОГОВИЦЫ С ПОМОЩЬЮ СЛЕЗОЗАМЕНИТЕЛЯ СТИЛЛАВИТR (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

ЦЕЛЬ. Оценка цитотоксичности антиглаукомного гипотензивного препарата, содержащего в составе бензалкония хлорид, и протекторного действия слезозаменителя СтиллавитR на культуре клеток лимба роговицы.

 МЕТОДЫ. Тестируемые образцы: латанопрост 0,005%, в качестве консерванта используется бензалкония хлорид 0,02% (БХ); СтиллавитR (натрия гиалуронат 0,16%, хондроитина сульфат натрия 0,05%, D-пантенол 1%, консервант — тетраборат натрия 0,05%). Была использована первичная культура клеток лимба роговицы. На первом этапе исследования оценивали эффект воздействия на клеточную культуру препаратов в 100% концентрации: латанопрост+БХ; и с одновременным добавлением в культуру Стиллавита. На втором этапе был проведен анализ влияния последовательных разведений препаратов на показатели цитотоксичности. Задачей третьего этапа была оценка уровня жизнеспособности клеток после экспозиции их с разведенными веществами в различной комбинации: латанопрост+БХ (воздействие в течение 30 минут); последовательное добавление в культуру Стиллавита и затем через 30 минут добавление препарата (латанопрост+БХ); одновременное добавление в культуру Стиллавита и препарата (латанопрост+БХ). Для оценки жизнеспособности клеток в культуре был проведен МТС-тест с использованием набора CellTiter 96R AQueous One Solution Reagent («Promega»). Дополнительно проводилось цитологическое исследование полученных результатов.

РЕЗУЛЬТАТЫ. Уровень жизнеспособности клеток при внесении препарата (латанопрост+БХ) в 100% концентрации составляет 13,95Ѓ}4,014%. При внесении исследуемого антиглаукомного препарата совместно со Стиллавитом уровень жизнеспособности достигает 22,03Ѓ}3,152%. В результате второй серии экспериментов было установлено, что выживаемость клеток на уровне 60-80% наблюдается при разведении препарата (латанопрост+БХ) в образце в 32 раза, а в отношении препарата к объему составляет 6,25%. На третьем этапе оценивали уровень жизнеспособности клеток при внесении к ним препаратов в разведении 6,25%. Уровень выживаемости клеток при воздействии препарата латанопрост+БХ составил 68,49Ѓ}20,61%. Было установлено, что как предварительное за 30 минут до внесения препарата (латанопрост+БХ), так и одновременное добавление Стиллавита увеличивает показатели выживаемости клеточной культуры — 94,95Ѓ}12,52 и 103,8Ѓ}12,45% соответственно. Наблюдаемые различия статистически значимы при уровне надежности 95%.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ. По результатам проведенных исследований in vitro были доказаны цитопротекторные свойства слезозаменителя Стиллавит в комбинации с препаратом, содержащим латанопрост+БХ, как при их 100%, так и 6,25% концентрации, что было подтверждено с помощью цитологического исследования.

1. Еричев В.П., Амбарцумян К.Г. Консерванты и вторичный синдром ≪сухого глаза≫ при длительной местной медикаментозной терапии первичной открытоугольной глаукомы. Глаукома 2011; 2:59-66. [Erichev V.P., Ambartsumyan K.H. The preservatives and secondary dry eye syndrome in long-term topical open-angle glaucoma therapy. Glaucoma 2011; 2:59-66. (In Russ.)].

2. Еременко А.И., Янченко С.В. Классификация факторов риска при вторичном сухом глазе. Фундаментальные исследования 2006; 7:34. [Eremenko A.I., Yanchenko S.V. Classification of risk factors in secondary dry eye. Fundamental research 2006; 7:34. (In Russ.)].

3. Федоров А.А. Морфологические основы научных исследований в офтальмологии. Вестник офтальмологии 2013; 129(5):10-21 [Fedorov A.A. Morphological bases of scientific researches in ophthalmology. Vestn oftalmol 2013; 129(5):10-21. (In Russ.)].

4. Ammar D.A., Noecker R.J., Kahook M.Y. Effects of benzalkonium chloride-and polyquad-preserved combination glaucoma medications on cultured human ocular surface cells. Advances in therapy 2011; 28(6):501-510. https://doi.org/10.1007/s12325-011-0029-x

5. Khoh-Reiter S., Jessen B.A. Evaluation of the cytotoxic effects of ophthalmic solutions containing benzalkonium chloride on corneal epithelium using an organotypic 3-D model. BMC ophthalmology 2009; 9(1):5. https://doi.org/10.1186/1471-2415-9-5

6. Rolando M. et al. The effect of different benzalkonium chloride concentrations on human normal ocular surface: a controlled prospective impression cytology study. The Lacrimal System. Amsterdam: Kagler&Ghedini; 1991:89-91.

7. Rasmussen C.A., Kaufman P.L., Kiland J.A. Benzalkonium chloride and glaucoma. J Ocular Pharmacol Ther 2014; 30(2-3):163-169. https://doi.org/10.1089/jop.2013.0174

8. Yanochko G.M. et al. Comparison of preservative-induced toxicity on monolayer and stratified Chang conjunctival cells. Toxicology in Vitro 2010; 24(4):1324-1331. https://doi.org/10.1016/j.tiv.2010.02.001